引物作為分子生物學和遺傳學領(lǐng)域中最基本的工具之一，它們在許多應(yīng)用中都發(fā)揮著重要的作用，包括PCR、實時熒光PCR、基因突變分析、克隆和基因表達以及DNA測序等。
作為引物合成的關(guān)鍵原料，DNA亞磷酰胺單體，其質(zhì)量的可靠性和雜質(zhì)水平對引物的質(zhì)量和后續(xù)的生物試驗起到至關(guān)重要的作用。
引物合成的文獻方法有不同路徑，目前主流的合成方法為固相亞磷酰胺三酯法，經(jīng)過數(shù)十年的行業(yè)發(fā)展，商業(yè)化的合成儀可以完成從微克到公斤級的寡核苷酸包括引物的合成制備。然而在固相亞磷酰胺三酯法中，依然會出現(xiàn)基因突變（雜質(zhì)寡核苷酸），除了關(guān)注反應(yīng)過程中使用的溶劑、催化劑、輔料等，核心的關(guān)注點之一在于DNA亞磷酰胺單體的純度、水分、雜質(zhì)等因素。
浙江恒康藥業(yè)股份有限公司NNaA平臺，得益于近20年的小分子化合物合成、純化、雜質(zhì)研究、藥品法規(guī)的經(jīng)驗積累，持續(xù)穩(wěn)定地提供高品質(zhì)DNA亞磷酰胺單體，為全球引物合成、基因合成企業(yè)保駕護航。
DNA亞磷酰胺單體的雜質(zhì)淺析
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我們將亞磷酰胺單體結(jié)構(gòu)分為上圖6個基團，其中DNA亞磷酰胺單體紫色X為空。紅色戊糖環(huán)通常不會對產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生影響。
- 綠色膦保護基團，在DNA亞磷酰胺單體的合成過程中，因為膦試劑作為起始原料之一，其質(zhì)量問題，從而導致P的保護不到位，或是有其他膦基團（雜質(zhì)），在引物合成中，導致5’-3’不能反應(yīng)或是產(chǎn)生其他反應(yīng)，導致引物合成中產(chǎn)生突變。
- 藍色DMTrO基團，在DNA亞磷酰胺單體的合成過程中，反應(yīng)反應(yīng)條件控制和工藝本身的問題，其保護率不高，5’仍有數(shù)部分OH未保護，導致在后期引物合成中發(fā)生副反應(yīng)，進一步導致引物合成中產(chǎn)生突變。
- 黃色堿基，堿基的雜質(zhì)可能存在風險是核苷原料自帶非目標堿基，例如dA中含有dC，導致dA的DNA亞磷酰胺單體含有dC的DNA亞磷酰胺單體，導致產(chǎn)生突變。
- 深綠色堿基保護基團，因為工藝和原料的問題，導致保護基完全保護，導致在后續(xù)的反應(yīng)中產(chǎn)生更多其他單體雜質(zhì)，進而導致引物合成中生產(chǎn)突變。
浙江恒康藥業(yè)的NNaA平臺，源自醫(yī)藥千噸級產(chǎn)能原料藥符合ICH規(guī)范的GMP管理體系和近20年小分子原料藥研發(fā)經(jīng)驗，嚴格管控原料篩選、質(zhì)量控制、雜質(zhì)控制、工藝操作、生產(chǎn)管理、分析放行等等，并且根據(jù)客戶需求不斷優(yōu)化生產(chǎn)水平，用心生產(chǎn)和提供高純度、微水分、低雜質(zhì)的亞磷酰胺單體。
